目的：建立一套適用的培養(yǎng)操作規(guī)程，進行無污染條件下體外細胞擴大培養(yǎng)。

主體內(nèi)容：

操作步驟：

1、紫外燈照射超凈工作臺30分鐘（根據(jù)實際情況，可適當延長或縮短照射時間，但時間長一點總比時間短一點安全。）

2、將培養(yǎng)液、PBS、胰酶放在37℃水浴中溫育（每次用多少，溫育多少，這樣既可節(jié)約溫育的時間，又可延長藥品的使用期限。）

3、超凈工作臺照射30分鐘后，關(guān)閉紫外，打開照明，打開排風10分鐘后再次進入細胞培養(yǎng)室。（注意：要打開排風10分鐘后再進行操作，這樣才能保證循環(huán)的風是無菌的。同時還會避免有菌的風直接吹到人的呼吸道中，對人體也有一定的保護作用）

4、戴上kouzhao及手套（有條件的**好戴上帽子，不過也沒關(guān)系，我們實驗室就沒戴）

5、用70-75%的酒精擦試實驗物品，然后拿入超凈工作臺中。

6、操作時注意以下幾點：盡量在酒精燈火焰附近操作，但如果管子里有細胞就要離火焰有一定距離了，否則細胞要燙死了；不要重復使用移液管（即吸一次后，就換新的管）；不要在敞開的容器上方操作；手上的酒精不要擦太多，否則靠近酒精燈時容易把手燒到（我想很多人都有過被燒的經(jīng)歷吧）；

其實操作是很簡單的，但一定要仔細。尤其是第2步許多人都不注意，細胞平時放在37℃培養(yǎng)，如果加入的PBS或胰酶溫度太低，會對細胞有操傷的，雖然這種損傷短期內(nèi)察覺不到，但時間長了，就會顯現(xiàn)出來。